本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种亲水性磺胺类药物分子印迹固相萃取柱的制备方法。该亲水性磺胺类兽药分子印迹固相萃取柱的制备方法，包括如下步骤：（1）通过本体聚合法合成亲水性磺胺类分子印迹聚合物；（2）对步骤（1）所得的印迹聚合物进行表征，确定印迹结合位点的存在；（3）填充在聚丙烯固相萃取柱。所制备的亲水性固相萃取柱具有强大的吸附功能、较强的特异性、回收率高和较低的制备成本，同时改善了传统样品前处理技术的所需溶剂量大的缺点。可以直接用于动物源性食品中十种磺胺类兽药的检测，其对磺胺类药物具有高选择性吸附和高效富集的特点，并且，该固相萃取柱可以用于完全水相中磺胺类兽药的检测。