本发明公开了一种具有抗凝血与溶血栓地龙多肽及其酶解制备方法与应用，制备方法包括：地龙干体清洗干燥，粉粹成粉；加水搅拌，离心，得蛋白沉淀；将蛋白加水溶解，加入碱性蛋白酶，酶体积与蛋白重量之比0.1~3mL：100g，搅拌；灭酶活，加入胰蛋白酶，酶质量与蛋白重量比0.5~5g：100g，温度25~60℃，搅拌；酶解液过阴离子交换柱，收集部分洗脱液；再过大孔吸附树脂，分离纯化，收集干燥，得地龙抗凝血肽粉。本发明为高活性抗凝血类活性物质增加了新来源，具有产品活性高、制备过程方便可行、环保等优点，可作为预防血栓、溶血栓、降血稠类食品的原料，辅以乳糖、甘露醇等，制成粉剂、片剂、胶囊或口服液。