本发明公开了一种鸡新城疫病毒毒株及其在制备鸡新城疫病疫苗中的应用。本发明提供的鸡新城疫病毒毒株，其制备方法包括如下步骤：将重组质粒pBrClone30?GM?CSF、pBL?N质粒、pBL?P质粒和pBL?L质粒共转染哺乳动物细胞并培养，得到所述鸡新城疫病毒毒株；所述重组质粒pBrClone30?GM?CSF为具有序列表的序列3自5’末端第2703?18408位核苷酸所示的DNA分子的质粒。本发明通过在现有新城疫活疫苗基因组中引入分子佐剂GM?CSF，可以有效提高免疫效果，极大缩短免疫空白期，同时可抵抗母源抗体，提高免疫保护率。本发明对于新城疫病的防治具有重大价值。