本发明属于分子生物检测技术领域，提供了一种从环境中分别检测、鉴定李斯特属六个种细菌的六对PCR引物、检测的方法。本发明提供的PCR引物对是根据李斯特属细菌特异性靶基因iap设计而成，该靶基因稳定高、特异性强，经合理的PCR反应体系，凝胶电泳检测手段，可快速、准确地鉴定出存在于环境中的六个种的李斯特菌。检测方法步骤包括：(1)提取样品DNA，分别选用不同引物对进行PCR扩增；(2)根据PCR扩增产物片段长度判断待测样品中是否含有李斯特属细菌。该方法可快速、准确、灵敏地检测和鉴定环境和食品样中6种李斯特菌，不仅提高了效率，节约时间，而且节省检测成本。