本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明提供一种定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体采用荧光微球标记。本发明所提供的检测试剂盒首次将高尔基体糖蛋白-73 GP73通过荧光微球免疫层析技术进行检测，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。