本发明公开了一种以羟基尼罗红为母体的硫离子荧光探针的合成方法及应用。该荧光探针是以羟基尼罗红(NR-OH)、2，4-二硝基苯磺酰氯为原料，以N，N-二异丙基乙胺(DIEA)为缚酸剂，以二氯甲烷为溶剂，室温下经一步反应制备而成。该探针能对硫离子实行高灵敏度、高选择性的荧光检测。与现有的有机小分子荧光探针相比，本发明得到的荧光探针具有较长的发射波长，变色明显，可在THF-H2O溶剂体系中实现对微量硫离子的高灵敏度、高选择性检测；且合成路线简单，易于纯化，适于放大合成和实际生产应用，在生物和环境检测领域有着巨大的应用前景。