本发明公开了一种用于2,4,6-TNT检测的生物纳米传感器制备方法，该方法采用标准化学合成方法合成2,4,6-三硝基甲苯（2,4,6-TNT）特异性敏感的巯基化多肽（WHWQRPLMPVSID-SH），并利用其巯基与纳米金属颗粒的共价连接将其固定于纳米传感器件表面；检测时，目标分子2,4,6-三硝基甲苯与巯基化多肽的特异性结合引起纳米传感器表面的光学折射特性的改变，导致传感器透过的透射光光谱的相应变化，实现对目标分子2,4,6-三硝基甲苯的检测；较已有用于2,4,6-三硝基甲苯检测的生物传感器，本发明由于巯基化多肽修饰具有灵敏度高、生物结构稳定性好和成本低廉的优点。