本发明公开了一种层析卡检测仪的光路结构，包括光源光路和信号光光路，激发光光源产生激发光束，激发光束依次经过分光片和柱面透镜组件到达检测区构成光源光路，激发光束聚焦照射在检测区产生信号光，信号光依次经过柱面透镜组件和分光片到达滤光片构成信号光光路，所述光源光路和信号光光路在柱面透镜组件和分光片之间重叠。本发明结构简单，设计合理，能有效缩短光路，减少光路元件，从而缩小整个检测仪的体积，便于携带，保证整个检测仪的可靠性，减少故障的发生几率。