本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供了一种食用油过氧化值的酶生物传感器的制备方法，使其易于产业化制作和一次性使用，缩短了样品处理和检测时间，从而实现样品的现场、快速、精确检测。步骤如下：1，在酶生物传感器检测电极的工作电极上采用丝网印刷法印刷一层壳聚糖膜，印刷辣根过氧化物酶的混合浆液，50℃干燥；2，再次印刷含有酶底物、反应促进剂噻唑、表面活性剂、羟乙基纤维素等的混合浆液，50℃干燥，粘贴上隔离片；3，将待测的食用油样品与萃取液混合形成反应液，滴加到酶生物传感器检测电极加样孔中；4，检测工作电极与对电极之间的电流，并与单片机中储存的标准曲线进行比对，转化为过氧化值的浓度。