本发明涉及一种湿热灭菌化学指示卡签的制备方法，属于医疗消毒灭菌技术领域。本发明所述的湿热灭菌化学指示卡签的制备方法，包括粘贴、压制、印刷、涂覆化学指示物和模切，还在化学指示物表面印刷保护层，模切时进行正反面预切；所述保护层为透明液体。本发明操作简单，成本低，安全方便，社会效益好，制备的产品质量可靠；印刷保护层有效保护了化学指示物，提高了化学指示物变色的准确性；正反面预切避免了胶黏剂对灭菌器械等物品的污染，消除了医疗安全隐患。