本发明涉及一种食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法，前处理选用含有内标的无水乙醇超声萃取样品，萃取液过滤膜后直接进入气相色谱-质谱联用仪进行测定，选择离子模式检测，内标法进行定量。本方法采用气相-质谱联用测定食用香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，方法样品处理简单、易于操作，检测成本低，方法重复性好，回收率高，可以实现对香精香料中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量进行快速、准确、批量测定，且实验过程不使用有毒有害化学品，对操作人员危害小，对环境无污染。