本发明公开了一种同时测定黄草乌药材中3种双酯型二萜生物碱类物质的方法，精密称取滇乌碱、黄草乌碱甲和黄草乌碱丙对照品，配制成滇乌碱浓度0.562mg·mL-1、黄草乌碱甲浓度1.260 mg·mL-1、黄草乌碱丙浓度0.452mg·mL-1的混合溶液，得到对照品溶液；取黄草乌药材粉末2.00g，精密称定，加25%氨水3mL，润湿；精密量取萃取溶剂50mL，加至含样品的锥形瓶中并精密称定，密封，超声处理，冷却至室温，再次精密称定，补足失去的质量，滤过，量取续滤液，回收，溶解残渣，滤过，得到供试品溶液；将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测。本发明建立了以黄草乌中主要双酯型二萜生物碱成分为检测指标的黄草乌药材的检测方法，对于黄草乌药材的质量控制研究具有重要意义。