本发明涉及一种副猪嗜血杆菌的检测试剂盒及其检测方法，属于分子生物学技术领域，该检测试剂盒包括引物对、PCR Mix、阳性对照和ddH2O。本发明针对具有高度保守区域的mviN基因序列设计的引物对，特异性好，能够准确的区别副猪嗜血杆菌LC株同副禽嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌；且本发明提供的试剂盒及检测方法灵敏度高，耗时短且检测准确，对于监控该菌的繁殖、疾病发生和流行以及疾病的及时防治都具有重要的意义。