本发明公开了一种四氧化三铁纳米团簇模拟酶及制备方法以及用其快速检测乳酸的方法，该模拟酶是由细小的四氧化三铁纳米晶进行自组装形成的团簇状疏松颗粒，具有较大的比表面积。该模拟酶的制备方法，包括如下步骤：将三氯化铁、无水乙酸钠溶于乙二醇中，再加入去离子水搅拌，使之形成分散均匀的溶液；将步骤A得到的溶液装入水热反应釜中，放入已升温至160℃—200℃烘箱中反应；洗涤，真空干燥后得到固体样品。本发明不仅提供了一种高效的模拟过氧化物酶材料，同时还建立了一种选择性高、简便、灵敏地检测乳酸的新方法，可广泛应用到临床医学诊断和食品安全监测方面。