本发明涉及一种定量检测miRNA的RT‑PCR方法，miRNA加Poly(A)尾和逆转录在同一反应体系中进行,利用S‑Poly(T)引物进行miRNA的逆转录。本发明S‑Poly(T)Plus法中，miRNA的Poly(A)加尾和逆转录将在一个反应体系中同步完成，操作简便，缩短时间，用于合成cDNA的时间至少减少0.5h，具有更高的逆转录效率。本发明结合S/P miRsol RNA法和S‑Poly(T)Plus法，建立了一种非常灵敏、高效、简便、快捷、廉价的从提取到检测的技术体系。该技术体系尤其适合于从miRNA丰度较低的生物体液样本中检测miRNA。