本发明公开了一种提高罗汉果甜苷中罗汉果甜甙V纯度的方法，以罗汉果鲜果或罗汉果干果为原料，经过1）提取、2）预浓缩、3）酶解、4）一次过滤、5）树脂吸附、洗脱、6）浓缩、二次过滤、7）树脂柱脱盐、8）树脂柱脱色、9）活性炭进一步脱色以及10）灭菌、干燥步骤完成。本发明通过吸附柱对料液中的主要有效物进行吸附，再用洗脱液洗脱吸附柱上的有效物，最后将洗脱液经脱盐树脂去除杂味，经脱色树脂去除色素，最后通过活性炭吸附，进一步去除杂质，灭菌干燥后得到产品。本发明最终产品颜色雪白，无异味，口感清甜，后甜绵长，类白砂糖，甜度为砂糖的500‑1000倍，同时热量几乎为0，可应用于代糖产品及减肥保健食品中。