本发明涉及一种芽孢杆菌的检测技术，提供一种快速检测凝结芽孢杆菌的方法及多重PCR试剂盒，该方法检测快速准确，敏感性高，且操作简单成本低。本发明提供的试剂盒和方法可以特异的扩增凝结芽孢杆菌基因组中的coag基因和comK基因序列，而不会扩增得到其他细菌的基因片段，特异性强。特别是与凝结芽孢杆菌分子序列相似度较高的甲基营养型芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌，不能扩增得到基因片段。能够准确、有效的检测出待检样品中是否存在凝结芽孢杆菌。