本发明公开了一种蝗虫微孢子虫及其悬浮培养方法和应用。其中，所述的蝗虫微孢子虫株，为从亚洲飞蝗(Locusta migratoria L.)中分离，经蝗虫体内传至10代，体外培养传至10代后获得，保藏号为CGMCC No.11170。进一步的，本发明还提出了一种用于体外培养蝗虫微孢子虫的培养基及悬浮培养方法，所述培养基以昆虫源性、水溶性、去乙酰化的几丁质为细胞外基质，聚乙烯吡咯烷酮作为粘性补充剂，同时添加了蛋白提取物，采用本发明公开的培养基、利用生物反应器进行微载体悬浮扩增培养，能够使得经微载体悬浮培养的微孢子虫数达到起始培养的60倍。本发明提供了一种体外大量培养蝗虫微孢子虫的方法，为蝗虫微孢子虫作为生物杀虫剂的大规模使用提供了技术支持。