本发明涉及制革化学与工程技术领域，提供一种以多孔羧甲基纤维素‑聚乙烯醇微球为载体的固定化复合脱毛酶及其制备方法，所述以多孔羧甲基纤维素‑聚乙烯醇微球为载体的固定化复合脱毛酶以多孔羧甲基纤维素‑聚乙烯醇微球为固定化酶用载体，该载体亲水性好，且有较高的机械强度，空隙多，多孔性赋予了微球对酶有很好的物理吸附性能，能够有效实现酶的固定化，提升酶的固载量和活力，且具有良好的稳定性和可重复使用性，将以多孔羧甲基纤维素‑聚乙烯醇微球为载体的固定化复合脱毛酶用于生皮脱毛和分散胶原纤维，生产条件温和，对皮胶原水解过程和胶原纤维的分离松散程度的可控性提高，可以避免生产中产品质量的波动。