本发明提供了一种检测三唑醇的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有三唑醇偶联抗原的酶标板、三唑醇单克隆抗体、酶标记抗抗体、三唑醇标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测三唑醇残留量的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测烟叶中三唑醇的残留量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。