本发明公开了一种检测过氧化氢的荧光探针及其制备方法和应用，检测过氧化氢的荧光探针，其结构式如下：其中，R1‑R5中任意1个或2个为吸电子基团。本发明的荧光探针响应基团新颖、选择性好、灵敏度高；该探针激发发射波长在近红外，对组织损伤小且穿透力强，能用于活体成像。制备方法是，将3‑氨基苯酚与Cy.7.Cl进行取代反应后得到Cy‑Ph‑NH2，然后经过retro‑Knoevenagel反应得到P‑NH2，最后与苯乙醛酸的衍生物经取代反应得到产物P‑R，即为检测过氧化氢的荧光探针。本发明合成方法简单，适于工业化生产。