本发明公开了一种槲蕨的离体保存方法，包括槲蕨的组培两步成苗，再利用组培两步成苗得到具有4~6片叶的试管苗，接种到保存培养基进行离体保存，本发明保存培养基为1/2MS+AC0.3%+蔗糖4.5%+琼脂0.4%。培养基的pH值为5.8，温度为23±1°C，光照强度1400~1600lx，光照时间为8~10小时/天。利用本发明的方法可在短期内提供大量槲蕨的优质种苗，同时减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，并且有效解决了槲蕨种质资源保存及规模化育苗问题。