一种用于检测O型FMDV抗体的固相阻断ELISA试剂盒，该试剂盒中含有酶标板、洗涤液、样品稀释液、兔抗血清、酶标二抗、底物A液、底物B液、终止液、阳性对照血清、阴性对照血清，其中所述酶标板包被有O型FMDV基因工程抗原。本发明试剂盒使用固相阻断法，与传统间接ELISA试剂盒比，降低了非特异性抗体干扰，检测结果更准确，且不区分样品宿主来源。本发明试剂盒使用基因工程技术制备的蛋白和血清多抗进行试剂盒生产，简单安全，成本低，可广泛应用于O型FMD疫苗免疫效果监测与疫情监测。