本发明公开了一种纳米纤维抗菌非织造材料及制备方法。本发明的纳米纤维抗菌非织造材料，包括至少两层纳米纤维抗菌层，相邻两层纳米纤维抗菌层之间设置有纳米纤维亲水层，纳米纤维抗菌层的纳米纤维在三维空间交叉排列，形成具有纳米微粒、纳米纤维团簇的孔洞，孔洞内分布有纳米银抗菌颗粒和纳米氧化锌抗菌颗粒；纳米银颗粒和纳米氧化锌抗菌颗粒分布于具有纳米微粒、纳米纤维团簇的孔洞中，并且抗菌颗粒不易脱落，共同作用使纳米纤维抗菌非织造材料有持久的抗菌性。另外，纳米纤维亲水层提供了纳米纤维抗菌非织造材料良好的亲水性能。本发明制备方法制得的纳米纤维抗菌非织造材料可广泛应用于日用品、医疗保健、婴幼儿及成人卫生用品等领域。