本发明涉及医学检测技术领域，特别涉及一种游离脂肪酸检测试剂盒，含有试剂1和试剂2，试剂1中含有磷酸二氢钠、辅酶A、三磷酸腺苷、酰基辅酶A合成酶、MgCl2、Trinder底物，调节pH到7.2；试剂2中含有磷酸二氢钠、黄素腺嘌呤二核苷酸、4氨基安替比林、酰基辅酶A氧化酶、过氧化物酶、烷基糖苷APG0810、甘露醇、EDTA‑2Na、十二烷基聚氧乙烯醚，调节pH到7.2。通过对试剂中表面活性剂的选择，使得各种酶活性稳定，不易沉淀，保质期延长，降低企业风险成本，提高企业效益。