本发明公开了一种单质硒含量的测定方法。富硒蛋白多糖中加入XIV型蛋白酶，超声辅助酶解，将酶解液进行离心，所得到的沉淀在盐酸介质中，用双氧水在常温下进行氧化，所得到的四价硒在酸性条件下与2，3‑二氨基萘（DAN）反应生成苤硒脑络生物，用环己烷萃取；测定环己烷层荧光强度，从而计算出富硒蛋白多糖中单质硒的含量。对硒的测定避免使用了混合酸，同时大大减少了酸的用量；消化在常温下进行，可以避免强氧化还原性酸对实验室环境的污染，同时可防止硒的挥发损失，得到较高回收率；单质硒的消解时间短，约30分钟可以完成。