本发明公开了体液循环DNA定量检测方法及试剂盒。选择人单拷贝看家基因β‑actin为检测靶基因，人工合成一长度为45bp的双链DNA片段，其中包含25bp与β‑actin基因相同的序列，并重组至质粒载体T‑Vector pMD20中获得重组质粒DNA作为内标以一定量投入待测体液样本中，与体液循环DNA同步进行保存、核酸提取纯化和荧光定量PCR扩增，以用于体液循环DNA定量分析。本发明通过特殊内标的设立，消除了体液样本分析前和分析中由于核酸降解、提取丢失和PCR扩增效率不同而造成的检测偏差，能够对体液循环DNA进行更加稳定准确的定量检测。