本发明提供了一种香豆素衍生物DOCOPA及其制备方法和应用。所述的DOCOPA，英文名称为(E)‑4‑(3‑(7‑(diethylamino)‑2‑oxo‑2H‑chromen‑3‑yl)‑3‑oxoprop‑1‑en‑1‑yl)phenyl acrylate）。制备方法：先将3‑乙酰基‑7‑N,N‑二乙胺基香豆素、对羟基苯甲醛溶于乙腈中，加入催化量的哌啶，回流至反应完全；进一步得到中间化合物；再将中间化合物、三乙胺溶于二氯甲烷中，冰浴中逐渐滴加丙烯酰氯，室温搅拌至反应完全，减压蒸干后柱色谱分离得到DOCOPA。所述的应用，是基于DOCOPA在pH 7.8体系中对半胱氨酸和同型半胱氨酸区分检测，并用于细胞内半胱氨酸和同型半胱氨酸成像。DOCOPA对半胱氨酸和同型半胱氨酸显示了高的灵敏性和选择性。