本发明公开了一种细菌抗药性检测系统及其操作方法，系统包括药敏试验接种仪、药敏试验图像采集转换仪、药敏检测盒、菌株培养器，药敏检测盒中设置有培养基，药敏试验接种仪向药敏检测盒中接种菌株，菌株培养器为药敏检测盒中的菌株提供生长环境，药敏试验图像采集转换仪用于采集转换药敏检测盒中的菌株图像，药敏试验图像采集转换仪中设置有管理软件，该管理软件与网络连通。本发明线上线下结合，直接指导临床用药；在满足现场检测需要的同时，方便养殖场、兽药厂和管理部门的数据分析和决策；适应我国目前较高水平的抗药性现状，满足抗药性定量的网络化监测需要；兼顾肉汤稀释法与琼脂稀释法，适应大规模监测与零散样品检测的不同需要。