本发明提供了一种定量检测含糖醛酸多糖的方法，具体步骤：用三氟乙酸配制含糖醛酸多糖标准品溶液，含糖醛酸多糖为主链由己糖醛酸‑氨基己糖或己糖醛酸‑己糖重复二糖片段构成的多糖；将标准品进行酸水解、除酸，得到待测样品酸水解残余物；对标准样品酸水解残余物进行溶解，利用高效液相色谱仪串联三重四极杆质谱仪分析，得到多反应监测色谱图及标准曲线；采用与相同的方法处理并检测待测样品酸水解残余物；鉴定含糖醛酸多糖种类、得到待测样品中含糖醛酸多糖的含量。本发明操作步骤简捷，试剂价格低廉，耗时较短，且能够同时对多个由一个糖醛酸与一个氨基己糖或己糖的重复二糖片段组成的多糖进行准确定量。