本发明是一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，该试剂盒的主要组成为：鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液；酶标ORF90多抗溶液；稀释液；TMB底物溶液；终止液；鲤疱疹病毒2型阳性对照；阴性对照；包被液；96孔酶标板。本发明还涉及一种检测方法。本发明试剂盒和方法可用于无临床症状的潜伏感染鱼病毒检测，并可进一步应用于鲤疱疹病毒Ⅱ型在鱼体内变化规律的研究，从而为该病毒的防控提供依据。本发明方法与鲫鱼、金鱼的其它常见病毒无非特异性反应，可以用于国内养殖场的疫病诊断和出入境鱼类检疫。