本发明公开了一种家蚕内参蛋白GAPDH多克隆抗体及其制备方法，制备方法包括以下步骤：第一步、GAPDH/pET‑28a原核表达载体构建：（1）家蚕RNA提取；（2）反转录；（3）PCR扩增；（4）GAPDH/pMD‑19T构建；（5）GAPDH/pET‑28a重组质粒构建；第二步、GAPDH融合蛋白的原核表达；第三步、GAPDH多克隆抗体的制备；制备的GAPDH多克隆抗体特异性高、成本低、周期短，不仅为进一步获得可商品化的GAPDH抗体奠定基础，为家蚕及其他近源昆虫蛋白的功能研究提供有力工具和技术支撑，同时也弥补市场上商品化内参抗体大多来源于哺乳动物的缺陷，增加内参抗体的多样性和选择性。