本发明提供了一种螺旋甾碱烷型糖苷生物碱(3β,5α,22α,25R)‑螺旋甾碱烷‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→2)‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→4)‑β‑D‑吡喃半乳糖苷及其制备方法与用途，该螺旋甾碱烷型糖苷生物碱对人肺腺癌细胞A549、人大细胞肺癌细胞H460和人肺鳞癌细胞SK‑MES‑1均具有抑制作用，且对A549细胞的半抑制浓度为19.22μg/ml，对H460细胞的半抑制浓度为80.03μg/ml，对SK‑MES‑1细胞的半抑制浓度为54.20μg/ml，可见本发明制备得到的(3β,5α,22α,25R)‑螺旋甾碱烷‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→2)‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→4)‑β‑D‑吡喃半乳糖苷及其制剂可用于治疗非小细胞肺癌。