一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂
摘要:
一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂,该方法包括:将核酸打断成核酸片段;连接第一接头序列;扩增得到两端具有第一接头序列的第一产物,其中引物序列上具有U碱基位点且具有或不具有切口酶识别序列,并且其中一条引物序列上具有第一亲和标记;使用USER酶酶切第一产物;环化酶切后的第一产物;去磷酸化酶或切口酶处理环化产物;使用固相载体与环化分子结合;进行限制性缺口平移反应;消化除去未发生限制性缺口平移反应的部分;连接第二接头序列;扩增得到两端具有第二接头序列的第二产物;变性第二产物,并对单链核酸分子进行环化。该方法能够提高文库插入片段长度,简化建库流程,缩短建库时间,降低建库成本。
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