- 专利标题: 一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂
- 专利标题(英): Method and reagent for constructing nucleic acid double-linker single-strand cyclic library
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申请号: CN201480082967.7申请日: 2014-11-26
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公开(公告)号: CN107002292A公开(公告)日: 2017-08-01
- 发明人: 江媛 , 李巧玲 , 阿莱克谢耶夫·安德烈 , 贺罗维茨·埃文 , 赵霞 , 王童 , 董超 , 李栋 , 徳马纳克·拉多杰 , 章文蔚 , 蒋慧
- 申请人: 深圳华大基因研究院 , 深圳华大基因科技有限公司
- 申请人地址: 广东省深圳市盐田区北山工业区综合楼;
- 专利权人: 深圳华大基因研究院,深圳华大基因科技有限公司
- 当前专利权人: 深圳华大智造科技股份有限公司
- 当前专利权人地址: 广东省深圳市盐田区北山工业区综合楼;
- 代理机构: 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司
- 代理商 彭家恩; 罗瑶
- 国际申请: PCT/CN2014/092296 2014.11.26
- 国际公布: WO2016/082129 ZH 2016.06.02
- 进入国家日期: 2017-04-26
- 主分类号: C40B50/06
- IPC分类号: C40B50/06 ; C40B50/18 ; C12N15/11 ; C12N15/10 ; C12Q1/68
摘要:
一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂,该方法包括:将核酸打断成核酸片段;连接第一接头序列;扩增得到两端具有第一接头序列的第一产物,其中引物序列上具有U碱基位点且具有或不具有切口酶识别序列,并且其中一条引物序列上具有第一亲和标记;使用USER酶酶切第一产物;环化酶切后的第一产物;去磷酸化酶或切口酶处理环化产物;使用固相载体与环化分子结合;进行限制性缺口平移反应;消化除去未发生限制性缺口平移反应的部分;连接第二接头序列;扩增得到两端具有第二接头序列的第二产物;变性第二产物,并对单链核酸分子进行环化。该方法能够提高文库插入片段长度,简化建库流程,缩短建库时间,降低建库成本。
公开/授权文献
- CN107002292B 一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂 公开/授权日:2019-03-26