本发明公开了一种酒瓶兰试管苗种质保存方法，包括以下技术环节：）酒瓶兰幼株预处理；2）外植体取材、消毒与接种；3）不定芽诱导；4）慢生长增殖保存种质；5）复壮；6）不定芽壮根后移栽。本发明提供的酒瓶兰试管苗种质保存方法可显著延长酒瓶兰种质的保存时间，同时大大节省保存所需的劳力、物力和空间，而且操作简便，稳定可靠，可重复性强，酒瓶兰试管苗经过复壮、壮根移栽到温室，成活率高，生长健壮，有效保持了酒瓶兰种质的优良性状，为酒瓶兰优良种质的保存提供了技术保障。