本发明公开了一种柠檬发酵型烟用香料及其制备方法和应用，本烟用香料经如下步骤得到：(1)将柠檬进行前处理，制得培养基；(2)高温灭菌培养基；(3)接种：将菌株Aspergillus tubingensis GYC501接种到无菌培养基中；(4)培养箱中发酵；(5)分离纯化，制得澄清透明，并具有自然香韵和酿香香韵的柠檬发酵香料.本发明得到发酵型烟用香料香气成分与烟草协调性好，该香原料能够丰富烟香，烟气变得柔和细腻，抽吸时口感舒适，降低了口腔刺辣感，改善了卷烟吸味。