本发明涉及一组用于同时检测溃疡病菌、褐斑病菌和丛枝病植原体三种病原菌的核酸、试剂盒和检测方法，其中，用于多重PCR同时检测三种病原菌的核酸包括分别用于检测溃疡病菌、褐斑病菌和丛枝病植原体的上、下游引物；用于荧光定量PCR同时检测三种病原菌的核酸还包括有各病原菌对应的探针。本发明还建立了一种比较高效、灵敏的，可同时检测溃疡病菌、褐斑病菌和丛枝病植原体这三种病原的检测方法。该方法能有效提高检测的灵敏度，避免假阴性结果的发生。