本发明属于显微成像技术领域，具体涉及一种光片照明显微镜照明光路；提供一种可变光片厚度和长度的光片照明显微镜照明光路系统：由物侧至像侧依次包括沿着光轴排列的：激光光源、全球面镜的四组元机械补偿无焦变倍扩束系统、柱透镜、显微物镜；从激光光源发出的光，经过无焦变倍扩束系统实现出射激光光束口径的变化，再通过一个以光轴为旋转轴旋转90°的柱透镜形成一种片光，所形成的片光再通过一个消球差显微物镜去消减由于无焦变倍扩束系统以及柱透镜产生的球差，并且可使整个光片的光强更加均匀，可在不更换光片照明系统的情况下，实现对一定尺寸范围内的生物样本的观察。