本发明提供构建猪肺炎支原体小鼠发病模型的方法及鉴别强弱毒株的方法，属于动物模型领域。构建方法是对小鼠进行两次攻毒，第一次攻毒后13‑15天，获得小鼠发病模型；第二次攻毒是在第一次攻毒后42‑54小时进行的；每次攻毒时，向每只小鼠的左右鼻孔各滴入至少25μL 109CCU/ml的猪肺炎支原体培养物，然后对每只小鼠腹腔注射至少50μL 109CCU/ml的猪肺炎支原体培养物。鉴别强弱毒株的方法是构建小鼠发病模型，通过对小鼠肺脏病变进行评分等鉴别强弱毒株。本发明弥补了猪肺炎支原体体外细胞模型不能模拟体内环境的缺陷，也解决了多株猪肺炎支原体菌株在本体动物猪上进行试验的成本和场地等饲养环境的制约。