本发明公开了一种单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，属于氨基酸分离提取技术领域。具体的方法为将所述单子叶植物的茎或叶片中通过水浸、抽真空和离心的方法分离出细胞间隙液；将分离出细胞间隙液后的茎或叶片剪碎，冰浴内制浆、离心浆液，得细胞内液和固体残渣；分别检测所述细胞间隙液和所述细胞内液中可溶的游离氨基酸含量和可溶的蛋白水解氨基酸的含量，并检测固体残渣中的不可溶的蛋白水解氨基酸的含量，得不同存在形式氨基酸的含量。该方法真实反映出氨基酸在植物体内的分布与运输，这对于探索植物生理、代谢、发育具有极其深远的理论和实际应用价值。