本发明提供了一种神经干细胞球玻璃化冻存及复苏的方法，将神经干细胞球贴附于细胞球收集片；然后将细胞球收集片于冻存液中孵育后液氮冷冻，然后转入冻存管中于液氮中保存；复苏时，将细胞球收集片在复苏培养基中孵育复苏，以神经干细胞完全培养基培养后传代，再按照正常方式培养、传代；所述细胞球收集片，包括贴壁面和支架；所述贴壁面为长方形；所述支架与贴壁面的短边垂直相连，呈L型；所述支架高度小于贴壁面长度。本发明提供的神经干细胞球玻璃化冻存和复苏方法，可将神经干细胞球高密度束缚于一个较小的贴壁面，达到了玻璃化冻存的前提条件，并且细胞球摊开贴壁有效减小了神经球的厚度，提高了冻存保护剂的渗透效率。