本公开提供了一种用于检测艰难梭菌的胶体金试纸条，该胶体金试纸条包括依次相连接的吸水垫、基膜、金标垫和样品垫；所述基膜上设置有C线和T线，其中，所述C线上包被有dCas9抗体，所述T线上包被有tcdB基因片段‑牛血清白蛋白复合物；所述金标垫中含有胶体金标记的dCas9‑gRNA蛋白核酸复合物。本公开提供了一种用于检测艰难梭菌的试剂盒，其中，该试剂盒包括如上所述的用于检测艰难梭菌的胶体金试纸条。通过上述技术方案，本公开以dCas9‑gRNA与DNA特异识别的方式取代了常用的通过抗原抗体结合所开发的胶体金检测，有效提高了检测特异性及反应灵敏度。