本发明公开了一种耐受嗜中温细菌分解的冷水可溶性凝胶基质及其应用。基质的凝胶剂为卡拉胶或其改性修饰物中的至少一种，凝胶基质中添加有凝胶强度调整剂、卡拉胶酶抑制剂。本发明的微生物检测片，由于选用了不易被嗜中温细菌直接分解的冷水凝胶，同时加入特殊抑制凝胶酶分解的酶抑制剂和凝胶强度调整剂，保证了微生物的正常生长，避免了不利影响，因而使得含芽孢杆菌的样品在培养过程中不液化、不扩散、单菌落清晰易观察计数。由于形成琼脂样有一定凝胶强度的透明凝胶，大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌等培养后形成的菌落边缘相对更规则且颜色更明亮，特征与传统琼脂培养基接近，更典型。