本发明涉及一种通过高效液相色谱测定芍药苷含量的方法，包括如下步骤：1)采用体积分数为75～85％的甲醇的水溶液从含有芍药苷的待测样品中提取芍药苷，得待测液；2)将所述待测液通入高效液相色谱仪，采用反相C18色谱柱，以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱。该方法的回收率位于95.56～106.85％之间，检出限及定量限分别为285.1ng/mL，822.8ng/mL，RSD为0.014％-0.58％。该方法用于实际测定某批样品三次，样品中芍药苷含量在1.942％-1.997％之间。