本发明提供一种利用回文锁式探针检测肿瘤生物标志物的方法，设计了回文序列非荧光标记锁式RCA探针，（1）识别目标部分：能与目标miRNA完全互补，位于锁式探针的3’端与5’端；（2）切割位点部分：限制性内切酶Nt.AlWI的半识别位点，此位点融合了回文碱基片段。其与nicking切割酶结合，提出N-RCA概念，并发生双向链置换反应（D-SDA）联用，用于肿瘤标志物miRNA的检测。通过本发明可实现对let-7a miRNA的高效放大检测，而且经济实惠，有望用于临床诊断试剂盒开发。