本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种基于人铁蛋白的纳米酶及其制备方法。所述制备方法以人铁蛋白为融合伴侣，将目标酶置于其N端进行融合表达，在目标酶与人铁蛋白之间插入连接肽。本发明所述制备方法能够显著提高目标酶对底物的催化活性，且使酶对温度及pH有更强的耐受性。该制备方法不仅限于人铁蛋白与甲基对硫磷水解酶和大肠杆菌碱性磷酸酶的融合表达，还适用于人铁蛋白与多种酶的融合表达，用来改良目标酶的特性，在科学研究和应用基础研究中具有较高的研究价值和科学意义。