本发明属于荧光分析技术领域，具体涉及一种金银纳米簇AuAgNCs@APAP的制备方法及其作为荧光探针测定酸性和碱性氨基酸的应用。AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，包括以下步骤：取0.235 mL 24.28mmol/L HAuCl4溶液和0.235 mL 24.28 mmol/L AgNO3溶液于100 mL烧杯中，加入2.17 mL 50 mmol/L对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10 mL，10℃下反应2 h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1 kDa透析袋透析，即得所述AuAgNCs@APAP荧光探针。本发明利用对乙酰氨基酚（Acetaminophen，简称APAP），制备了一种金、银双金属纳米簇（AuAgNCs@APAP），并以AuAgNCs@APAP为荧光探针，该荧光探针稳定性好、荧光量子产率高而且其制备过程简便、耗时短，可很好的用于Arg、Lys、His、Asp和Glu的测定。