本发明涉及蛋白领域，具体涉及一种生物活性多肽ENPRAF及其制备方法和应用，生物活性多肽ENPRAF其氨基酸序列为Glu‑Asn‑Pro‑Arg‑Ala‑Phe。经过体外抗氧化实验、体内抗衰老实验，验证了多肽ENPRAF具有较好的抗氧化生物学活性和抗衰老活性，一方面，本发明的生物活性多肽ENPRAF具有较好的抗氧化活性，能够清除机体内的自由基，提高生命的质量；另一方面，能够提高体内抗过氧化酶系的活力，增强机体抵抗外源性刺激的功能，从而降低机体老化、衰老和生病的机率，对开发具有抗氧化功能、抗衰老功能的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。