本发明公开了一种含季铵盐离子液体体系中植物甾醇全细胞生物转化制备雄烯二酮(AD)的方法。将分枝杆菌Mycobacterium sp.NRRL B‑3683菌种进行种子液培养，再将种子液接种到发酵培养基中培养以制备静息细胞，所得静息细胞在含葡萄糖的Tris‑HCl缓冲液中活化培养7h，然后投入底物植物甾醇和0.1～1vol.％的亲水性乳酸/羧酸季铵盐离子液体作为共溶剂，进行生物转化反应，制备AD。本发明所用的季铵盐离子液体对底物植物甾醇的溶解度高达8～565g L‑1，远高于普通商业化离子液体，能有效促进底物和产物溶解，提高过程转化效率，且离子液体用料极少，有利于节约生产成本。