一种矿物浮选分离抑制剂及其制备方法，涉及选矿技术领域，特别涉及一种白钨矿和脉石矿物浮选分离抑制剂的制备方法与应用，所述矿物浮选分离抑制剂为十二烷基苯磺酰氯改下的羧甲基纤维素，其红外图谱在2926.35cm-1、1038.56cm-1、1400cm-1、1600cm-1处有吸收峰，取代度为0.300-0.503。所述矿物浮选分离抑制剂的制备方法，其包括：往反应容器中依次加入羧甲基纤维素、十二烷基苯磺酰氯、极性有机溶剂、缚酸剂进行改性反应，加热至50℃-80℃搅拌2-6小时。本发明制备的十二烷基苯磺酰氯改性羧甲基纤维素可以有效抑制萤石、方解石等矿物，用于白钨矿和脉石矿物浮选分离。